作者chenmick ()
看板Biotech
標題[求救] LNCap一pass就死一半
時間Mon Mar 3 14:26:15 2014
小弟最近開始接觸LNCap這個細胞株(購自食品所)
上網爬文又自己養了一陣子覺得還真的不好養@@
買來剛解完貼得超漂亮,但pass細胞後就長不好了
我已經知道這個細胞株容易飄,但不曉得為什麼每次pass細胞就死了3~4成
在顯微鏡底下觀察到許多疑似死細胞的黑色無光線折射殘骸
(也亮亮一坨坨飄在medium,但有人說是活細胞!?)
我試過以versene和trypsin處理細胞,結果都差不多
Medium配方(參考食品所):Sigma RPMI-1640 (Product No. R6504)(已含2mM L-glutamine),
NaHCO3 2g/L, HEPES 2.98g/L, D-Glucose 4.5g/L(有再外加補到final conc.),
Sodium pyruvate 1mM, 10% FBs, 1% P/S抗生素
請問這樣的medium可以嗎?
把LNCap打下來可以pipetting嗎?力道又是如何呢?
感謝!
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 203.64.48.9
1F：推 honey823:這個細胞真的比較容易飄起來, seeding後請讓它貼附生長 03/03 15:16
2F：→ honey823:至少24小時之後再去做實驗會好一點, 貼附的話, Corning有 03/03 15:17
3F：→ honey823:出一款cellbind的dish, 用來養這類型的細胞, 還不錯用 03/03 15:17
4F：→ honey823:medium的話應該沒太大問題, 我也用一樣的配方 (其實配方 03/03 15:18
5F：→ honey823:ATCC或者食科所都差不多), 我的medium是用Gibco liquid的 03/03 15:19
6F：→ honey823:打下來的話, 我是用trypsin 3~5分鐘, 其實PBS沖也會下來 03/03 15:19
7F：→ honey823:沒碰過死的這麼慘的問題, 要不要check一下CO2培養箱的 03/03 15:20
8F：→ honey823:CO2濃度? 以前用過Thermo可以滅菌的培養箱, 曾經發現滅菌 03/03 15:21
9F：推 honey823:後或者使用久了之後, CO2的濃度會跑掉, 以上為個人經驗. 03/03 15:23
感謝~ 我細胞pass完第二天才趕動它
細胞是用corning一般的dish(Standard Tissue Culture Treated)
請問coat poly lysine可以嗎?
thx~
※ 編輯: chenmick 來自: 203.64.48.9 (03/04 12:44)