作者mars52013146 (瘋狂恰吉)
看板Biotech
標題[求救] 小鼠組織抽RNA都抽不到
時間Thu Feb 13 13:25:44 2014
我拿小鼠肌肉組織來抽RNA過程如下
將組織放置研缽(已放在冰上並用液態氮冰過)壓碎後加入trizol 1ml
研磨到trizol回復到液狀蒐集到離心管加入200uL chloroform 10min
離心(低溫) 15min取上清液
加入等量isopropanol後室溫作用30min
離心(低溫) 15min吸掉上清液
加入1ml 75%酒精(DEPEC 水配置) wash pellet(只有沖起來沒有打散)
離心(低溫)後放室溫15min dry
用DEPEC水回溶50uL
我的問題是
1.我測RNA濃度 280/260比值介在1.6~1.7而260/230卻只有0.5...
我詢問抽過RNA的學長他說260/230要在1.5以上才好
2.我的組織已經放在-80冰箱半年這樣會有影響嗎??
我抽了3.4次了沒一次成功....T^T
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◆ From: 120.107.58.150
1F：→ roy047:260/230過低應該是吸到chloroform? 02/13 13:52
2F：→ mars52013146:我抽RNA濃度只有50ng/uL左右,最多才117ng/uL 02/13 13:52
3F：→ mars52013146:可是我沒有吸到最底還有殘留液體在分層那階段耶 02/13 13:53
4F：→ Ianthegood:+CHLOROFORM後的離心不要在低溫做試試看 02/13 14:16
5F：→ mars52013146:我加入chloroform是室溫作用10分鐘在低溫離心 02/13 14:32
6F：推 HEK293:磨完我會給他一次forzen-thaw cycle才做後續extraction 02/13 14:32
7F：→ mars52013146:喔~我看懂你的意思了,誤會誤會抱歉 02/13 14:32
8F：→ mars52013146:h大的意思是再加入液態氮在冷凍一次在磨一次的意思 02/13 14:34
9F：→ Ianthegood:加chloroform之後有沒有搖阿? 02/13 14:35
10F：→ mars52013146:有,只有上下搖幾下沒有vortex 02/13 14:38
11F：→ huuban:抽完再酒精沉澱一次？ 02/13 19:59
12F：推 rebirth:你的問題是抽不到RNA，還是抽得到但是純度差？ 02/13 21:06
13F：推 reinherd:建議google Qiagen Fibrous Tissue RNA extration kit 02/14 04:48
14F：→ reinherd:肌肉這種fibrous tissue不容易取RNA 02/14 04:48
15F：推 patrickkuan:肌肉ＲＮＡ少,建議提高組織量 02/16 11:41