作者snagar (松鼠)
看板Biotech
標題[求救] 有關於定序的問題，為什麼會這樣..
時間Mon Jul 25 17:38:27 2011
由於我們是在做基因突變的篩檢，因此定序結果是我們判讀是否突變
或是heterozygous的主要方式。而最近發生了一個問題，特定兩個exon中
的特定一兩個位置，讀正向時每次都會出現heterozygous的pick，也就是
同一個位置有兩個pick，但是讀反向時就沒有出現，只有那兩個點有出現這
種情況。此外定序的雜訊很少，因此認為可能不是雜訊的問題。即使是不同
人的DNA都有這種情況發生，而且都是在相同的位置上產生。後來我將PCR體積
從25ul改成20ul後，好像就沒有這個問題發生了，是因為primer,DNA濃度??
原因為何好像還是無解，想知道大家有什麼想法。
附上定序的圖正向及反向
http://imgur.com/ZXXIu
非常感謝
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 203.64.247.35
1F：推 Realthugz:*peak 07/25 20:22
2F：推 lulusa:正反向定序本來就會有差 會有這種情況是PCR條件沒抓好 07/26 23:40
3F：→ lulusa:調整溫度 鎂離子 各種可能都可以改善 07/26 23:41
4F：→ snagar:感謝~~ 07/30 22:10