作者snagar (松鼠)
看板Biotech
标题[求救] 有关於定序的问题，为什麽会这样..
时间Mon Jul 25 17:38:27 2011
由於我们是在做基因突变的筛检，因此定序结果是我们判读是否突变
或是heterozygous的主要方式。而最近发生了一个问题，特定两个exon中
的特定一两个位置，读正向时每次都会出现heterozygous的pick，也就是
同一个位置有两个pick，但是读反向时就没有出现，只有那两个点有出现这
种情况。此外定序的杂讯很少，因此认为可能不是杂讯的问题。即使是不同
人的DNA都有这种情况发生，而且都是在相同的位置上产生。後来我将PCR体积
从25ul改成20ul後，好像就没有这个问题发生了，是因为primer,DNA浓度??
原因为何好像还是无解，想知道大家有什麽想法。
附上定序的图正向及反向
http://imgur.com/ZXXIu
非常感谢
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 203.64.247.35
1F：推 Realthugz:*peak 07/25 20:22
2F：推 lulusa:正反向定序本来就会有差 会有这种情况是PCR条件没抓好 07/26 23:40
3F：→ lulusa:调整温度 镁离子 各种可能都可以改善 07/26 23:41
4F：→ snagar:感谢~~ 07/30 22:10