作者mgh225 (..)
看板Biotech
標題[求救] blunt-end ligation
時間Sat May 21 21:54:51 2011
我有試過不同比例的 ligation
我在做 blunt end ligation 時
若也要用 ciap treat 來防止 self ligation
我的步驟如下 其中比較有問題的是
1. RE digest 1. 可以在 digest 完，先加 klenow 然後
2. gel extraction 再 gel extraction 嗎
3. add klenow fragment 2. 如左邊步驟，加完 klenow 後可以不用
clean-up ，直接加 ciap 嗎
4. clean-up 3. ciap 完後應該不用 clean-up了吧?
5. ciap treat
6. ligation
不知道有沒有大大可以告訴我你們做過的經驗呢，謝謝
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◆ From: 140.112.79.51
1F：→ U0:insert也去磷酸根嗎？ 一般只去vector的喔 05/21 22:54
2F：→ mgh225:喔 是的 只有vector 去磷酸根 insert沒有 05/21 22:57
3F：推 yaprint:ciap後不去除會影響ligation吧? 05/21 23:12
4F：→ mgh225:咦? 樓上說得好像是真的吼? 因為這樣INSERT也會影響到?? 05/21 23:33
6F：→ mgh225:感謝樓上的連結~ 原來在ligation真的要純化耶 05/21 23:55
7F：→ mgh225: 前 05/21 23:55
8F：推 Realthugz:要弄乾淨阿... 不要偷懶... 05/22 00:04
9F：→ mgh225:是 樓上大大說的是 不過其實我不是怕麻煩 我怕DNA量太少 05/22 00:06
10F：推 tina77kimo:我CIP和RE一起加耶~量和作用時間就是看說明書寫的方式~ 05/22 07:40
11F：推 icome:不純化CIP會連你的vector一起去磷酸 難怪接不起來 05/23 18:27