作者mgh225 (..)
看板Biotech
标题[求救] blunt-end ligation
时间Sat May 21 21:54:51 2011
我有试过不同比例的 ligation
我在做 blunt end ligation 时
若也要用 ciap treat 来防止 self ligation
我的步骤如下 其中比较有问题的是
1. RE digest 1. 可以在 digest 完，先加 klenow 然後
2. gel extraction 再 gel extraction 吗
3. add klenow fragment 2. 如左边步骤，加完 klenow 後可以不用
clean-up ，直接加 ciap 吗
4. clean-up 3. ciap 完後应该不用 clean-up了吧?
5. ciap treat
6. ligation
不知道有没有大大可以告诉我你们做过的经验呢，谢谢
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◆ From: 140.112.79.51
1F：→ U0:insert也去磷酸根吗？ 一般只去vector的喔 05/21 22:54
2F：→ mgh225:喔 是的 只有vector 去磷酸根 insert没有 05/21 22:57
3F：推 yaprint:ciap後不去除会影响ligation吧? 05/21 23:12
4F：→ mgh225:咦? 楼上说得好像是真的吼? 因为这样INSERT也会影响到?? 05/21 23:33
6F：→ mgh225:感谢楼上的连结~ 原来在ligation真的要纯化耶 05/21 23:55
7F：→ mgh225: 前 05/21 23:55
8F：推 Realthugz:要弄乾净阿... 不要偷懒... 05/22 00:04
9F：→ mgh225:是 楼上大大说的是 不过其实我不是怕麻烦 我怕DNA量太少 05/22 00:06
10F：推 tina77kimo:我CIP和RE一起加耶~量和作用时间就是看说明书写的方式~ 05/22 07:40
11F：推 icome:不纯化CIP会连你的vector一起去磷酸 难怪接不起来 05/23 18:27