作者donnasafin (..)
看板Biotech
標題[求救] GFP fusion protein問題
時間Fri Apr 16 11:48:20 2010
建構基因在GFP載體上
序列長度大約為2K bp
送質體到細胞中表現 並以抽完細胞蛋白
跑完 Western-blot 一抗以 Anti-GFP (mouse)
二抗以 Anti-mouse
結果只有GFP的蛋白質表現...
請問各位大大可能實驗上出了什麼問題 謝謝!!
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◆ From: 140.117.91.9
1F：推 williamyang:沒有in frame? 04/16 11:54
2F：→ donnasafin:挑了很多個clone,因為序列很長 所以沒先定序就先送細胞 04/16 17:03
3F：推 aggaci:沒定序？又只有gfp表現？肯定沒有接進去 04/16 22:49
4F：→ donnasafin:有用設計的primer去夾 請問這樣還是會有沒接好的可能嗎 04/17 00:43
5F：推 hurdle:如果Primer沒設計錯,有in frame,那可能是PCR產生stop codon 04/17 01:25
6F：→ hurdle:先定序吧~~(請教一下,在台灣定序跟Western那個比較便宜啊?) 04/17 01:27
7F：推 Lambe:GFP後面有沒有stopcodon? 04/17 04:06
8F：推 Lambe:現在送公司定序一支好像200-250NT 要怎樣比western的價錢?y 04/17 04:11
9F：推 snowypuppy:定序應該比Western便宜吧～～重點是省時阿! 04/17 22:24
10F：→ donnasafin:謝謝大家的回答~我會先定序 再看看問題可能在哪裡 04/18 00:20