作者donnasafin (..)
看板Biotech
标题[求救] GFP fusion protein问题
时间Fri Apr 16 11:48:20 2010
建构基因在GFP载体上
序列长度大约为2K bp
送质体到细胞中表现 并以抽完细胞蛋白
跑完 Western-blot 一抗以 Anti-GFP (mouse)
二抗以 Anti-mouse
结果只有GFP的蛋白质表现...
请问各位大大可能实验上出了什麽问题 谢谢!!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.117.91.9
1F：推 williamyang:没有in frame? 04/16 11:54
2F：→ donnasafin:挑了很多个clone,因为序列很长 所以没先定序就先送细胞 04/16 17:03
3F：推 aggaci:没定序？又只有gfp表现？肯定没有接进去 04/16 22:49
4F：→ donnasafin:有用设计的primer去夹 请问这样还是会有没接好的可能吗 04/17 00:43
5F：推 hurdle:如果Primer没设计错,有in frame,那可能是PCR产生stop codon 04/17 01:25
6F：→ hurdle:先定序吧~~(请教一下,在台湾定序跟Western那个比较便宜啊?) 04/17 01:27
7F：推 Lambe:GFP後面有没有stopcodon? 04/17 04:06
8F：推 Lambe:现在送公司定序一支好像200-250NT 要怎样比western的价钱?y 04/17 04:11
9F：推 snowypuppy:定序应该比Western便宜吧～～重点是省时阿! 04/17 22:24
10F：→ donnasafin:谢谢大家的回答~我会先定序 再看看问题可能在哪里 04/18 00:20