作者borhen (希望夢想成真)
看板Biotech
標題[求救] 請問蛋白質 (110kDa) 轉印上的效率問題
時間Thu Apr 8 20:05:07 2010
這是一個有關於蛋白質轉印上的問題
目前遇到一個問題是
大小蛋白質轉置效率不同, 這是正常現象嗎
(常常分子量小的蛋白質有transfer過頭 而大蛋白質還留在SDS膠上)
==> 還是說換 "濕式轉置槽" 會比較好 (效率會提升嗎) ? (針對大蛋白質110 kDa)
==> 還是說 半乾式大家所使用的條件? 不知道可不可請板友提供一下
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所使用的membrave : PVDF (有甲醇活化過)
儀器 : 半乾式轉置槽
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.113.173.32
1F：→ chaunen:110kDa.. 根據BD Transduction Laboratories 表示: 04/08 20:39
2F：→ chaunen:>120kDa的protein transfer buffer中要加入0.05% SDS 04/08 20:40
3F：→ chaunen:500mA 轉 3hr.. 04/08 20:41
4F：→ chaunen:transfer buffer:25mM Tris, 190mM glycine, 20%MeOH 04/08 20:43
5F：→ chaunen:這現象是正常的,大分子跑比較慢 04/08 20:44
6F：→ chaunen:transfer是濕式的... 04/08 20:45
7F：→ chaunen:不過我也想問同樣的問題... 有勞樓下~ 04/08 20:46
8F：→ vandia:我們家100kDa,semi-dry,20V30min... 04/08 21:07
9F：推 Lambe:這是正常現象 就像五樓說的那樣 所以就看你想看哪個大小的 04/08 21:59
10F：→ Lambe:半乾式的話用 memb area * 1.5=安培數 跑1hr 大概30-90kDa 04/08 22:01
11F：→ Lambe:都會過去 但更小分子的可能會透過memb 更大分子可能還會再 04/08 22:02
12F：→ Lambe:膠上 不過我沒試過濕式 據說電流越小跑越久這個現象會減小 04/08 22:04
13F：→ littlelizard:提高轉印buffer甲醇的濃度試試看 04/08 22:18
14F：→ chaunen:甲醇多反而更過不去吧?! 04/08 22:27
15F：推 silentence:多才會透-- 04/08 22:56
16F：→ borhen:謝謝各位的建議 04/08 22:58
17F：推 leoblack:正常~大蛋白用溼式的效率比較好,不然就SDS多加一點點 04/08 23:33
19F：→ chaunen:這裡說甲醇多, 大分子反而難transfer,(NC膜和PVDF膜不同?) 04/08 23:43
20F：→ chaunen:不對...和膜沒關係=.= 04/08 23:43
21F：→ leoblack:甲醇幫助fix(有人transfer完會泡甲醇fix), SDS幫助游離~ 04/09 01:06