作者borhen (希望梦想成真)
看板Biotech
标题[求救] 请问蛋白质 (110kDa) 转印上的效率问题
时间Thu Apr 8 20:05:07 2010
这是一个有关於蛋白质转印上的问题
目前遇到一个问题是
大小蛋白质转置效率不同, 这是正常现象吗
(常常分子量小的蛋白质有transfer过头 而大蛋白质还留在SDS胶上)
==> 还是说换 "湿式转置槽" 会比较好 (效率会提升吗) ? (针对大蛋白质110 kDa)
==> 还是说 半乾式大家所使用的条件? 不知道可不可请板友提供一下
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所使用的membrave : PVDF (有甲醇活化过)
仪器 : 半乾式转置槽
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.113.173.32
1F：→ chaunen:110kDa.. 根据BD Transduction Laboratories 表示: 04/08 20:39
2F：→ chaunen:>120kDa的protein transfer buffer中要加入0.05% SDS 04/08 20:40
3F：→ chaunen:500mA 转 3hr.. 04/08 20:41
4F：→ chaunen:transfer buffer:25mM Tris, 190mM glycine, 20%MeOH 04/08 20:43
5F：→ chaunen:这现象是正常的,大分子跑比较慢 04/08 20:44
6F：→ chaunen:transfer是湿式的... 04/08 20:45
7F：→ chaunen:不过我也想问同样的问题... 有劳楼下~ 04/08 20:46
8F：→ vandia:我们家100kDa,semi-dry,20V30min... 04/08 21:07
9F：推 Lambe:这是正常现象 就像五楼说的那样 所以就看你想看哪个大小的 04/08 21:59
10F：→ Lambe:半乾式的话用 memb area * 1.5=安培数 跑1hr 大概30-90kDa 04/08 22:01
11F：→ Lambe:都会过去 但更小分子的可能会透过memb 更大分子可能还会再 04/08 22:02
12F：→ Lambe:胶上 不过我没试过湿式 据说电流越小跑越久这个现象会减小 04/08 22:04
13F：→ littlelizard:提高转印buffer甲醇的浓度试试看 04/08 22:18
14F：→ chaunen:甲醇多反而更过不去吧?! 04/08 22:27
15F：推 silentence:多才会透-- 04/08 22:56
16F：→ borhen:谢谢各位的建议 04/08 22:58
17F：推 leoblack:正常~大蛋白用湿式的效率比较好,不然就SDS多加一点点 04/08 23:33
19F：→ chaunen:这里说甲醇多, 大分子反而难transfer,(NC膜和PVDF膜不同?) 04/08 23:43
20F：→ chaunen:不对...和膜没关系=.= 04/08 23:43
21F：→ leoblack:甲醇帮助fix(有人transfer完会泡甲醇fix), SDS帮助游离~ 04/09 01:06