作者hillary168 ( )
看板Biotech
標題[問題] shRNA之transient transfection及stable transfection
時間Tue Mar 2 20:23:06 2010
目前使用的shRNA是購於中研院
有表示其knockdown效率高達96%
但我用shRNA做transient transfection
使用lipo2000 RNAi transient tranfection 到HNK293 cell
隔天換新鮮medium培養，三天後取細胞total RNA
最後做RT-PCR 結果knockdown效率超差
所以想請問板上是否有人做過類似實驗?
在transient transfection之前，shRNA是否有何處理?
或使用哪種liposome? transfection時細胞幾成滿?
等等詳細流程，先在此感謝各位回覆
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 163.25.118.180
1F：推 liuse:HEK?? 03/02 23:34
2F：→ liuse:shRNA from BROAD(中研院RNAi core) 有時就是這樣 03/02 23:35
3F：→ liuse:你看到的宣稱有KD高效率 應該是別人回傳的data吧 03/02 23:35
4F：→ liuse:btw 中研院那邊應該每個gene都有對應至少五個shRNA 03/02 23:36
5F：→ liuse:有全部買來試過嗎? 五個應該也才不到一千塊(NTD) 03/02 23:37
6F：→ hillary168:對 是HEK293 打錯 謝謝 03/03 07:59
7F：推 icome:中研院的pLKO.1直接transient transfect效率很差 03/03 10:28
8F：→ icome:基本上pLKO.1是給你package lentivirus用的 不是給你直接送 03/03 10:29
9F：→ icome:你要直接挑stable才有效果 但我建議做virus比較快 03/03 10:30
10F：推 liuse:transient 不會差阿 尤其是用293 or 293T 03/03 11:52
11F：推 icome:是knockdown效率 很多人試過效果很差 原因不清楚 03/03 12:15
12F：→ icome:也許是因為它搭載的是U6 promoter? 03/03 12:16