作者willieh (willie)
看板Biotech
標題[求救] Western Blot大分子量中間變淡？
時間Sun Jan 17 17:36:56 2010
各位大家好，
小弟的Western Blot在偵測大分子量蛋白質(約170kDa左右)的時候，
遭遇到band兩旁深，中間淡的情形，
如下圖：
http://www.wretch.cc/album/show.php?i=willie0527&b=4&f=1281001381&p=0
同樣條件下，之前偵測的蛋白質都在100kDa以下，鮮少遇到這種情形。
因為不曉得是何原因，
目前打算先跑完SDS-PAGE後直接染色，看有無此情形，
藉此區分是electrohoresis還是transfer出問題。
在我troubleshooting的同時，
想先請教各位先進是否有遇過這種情形，
是否有任何建議或解決方式呢？
麻煩各位了，謝謝。
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My condition
Electrophoresis buffer
27 mM Tris
19 mM Glycine
0.1% SDS
pH 8.3
(100V, 1.5hr, Amersham SE250)
Transfer buffer
24.76 mM Tris
191.82 mN Glycine
0.01% SDS
10% Methanol
(100V, 400mA, 1hr, PVDF, Amersham TE22)
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.116.253.186
1F：推 icome:我偶而也會發生 似乎是transfer buffer用太多次就會發生 01/18 11:02
2F：推 FUSION87:我們家transfer buffer都現配 有時候也會這樣 只能重跑 01/23 01:06
3F：→ FUSION87:目前還不知道為什麼。不過我是猜會不會是loading太久?? 01/23 01:08