作者willieh (willie)
看板Biotech
标题[求救] Western Blot大分子量中间变淡？
时间Sun Jan 17 17:36:56 2010
各位大家好，
小弟的Western Blot在侦测大分子量蛋白质(约170kDa左右)的时候，
遭遇到band两旁深，中间淡的情形，
如下图：
http://www.wretch.cc/album/show.php?i=willie0527&b=4&f=1281001381&p=0
同样条件下，之前侦测的蛋白质都在100kDa以下，鲜少遇到这种情形。
因为不晓得是何原因，
目前打算先跑完SDS-PAGE後直接染色，看有无此情形，
藉此区分是electrohoresis还是transfer出问题。
在我troubleshooting的同时，
想先请教各位先进是否有遇过这种情形，
是否有任何建议或解决方式呢？
麻烦各位了，谢谢。
--
My condition
Electrophoresis buffer
27 mM Tris
19 mM Glycine
0.1% SDS
pH 8.3
(100V, 1.5hr, Amersham SE250)
Transfer buffer
24.76 mM Tris
191.82 mN Glycine
0.01% SDS
10% Methanol
(100V, 400mA, 1hr, PVDF, Amersham TE22)
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.116.253.186
1F：推 icome:我偶而也会发生 似乎是transfer buffer用太多次就会发生 01/18 11:02
2F：推 FUSION87:我们家transfer buffer都现配 有时候也会这样 只能重跑 01/23 01:06
3F：→ FUSION87:目前还不知道为什麽。不过我是猜会不会是loading太久?? 01/23 01:08