作者cloneting (1ting)
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標題Re: [求救] Pichia pastoris系統表現蛋白
時間Mon Nov 30 22:11:17 2009
※ 引述《molkna (孟克的吶喊)》之銘言：
: 大家好，
: 我目前在使用pichia pastoris表現系統表現病毒蛋白，
: 使用的vector是pGAPZa加上SMD1168 stain的酵母菌，
: 電穿孔後有挑到能生長在高抗生素的培養基上(Zeocin 2000ug/ml)，
: 但拿來表現蛋白後，不論是取100倍濃縮的上清液或是用玻璃珠打pellet，
: Westen blot都偵測不到。
: 培養條件是30度，270rpm搖兩到三天，
: 收取上清液濃縮100倍，
: Flask是燒凹角的三角錐形瓶(增加震盪)，
: 不知道有沒有在做相關研究的板友，
: 可站內信討論，相當感激!!
可以考慮換成aox表現量會比較好
或是用KM71H strain試試看
表現量好不好要依蛋白質不同而有很大差異
高抗性不一定高表現 但是高表現一般抗性都比較好
有每天加glucose去誘導嗎
最好每天取樣找到最佳誘導天數
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.232.120
1F：推 intotheman:membrane protein的話 很難表現咧 11/30 22:17
2F：→ cloneting:表現膜蛋白難度的確比較高要考慮用哪一種signal peptide 11/30 22:46
3F：推 molkna:之前拿了長COLONY的PLATE照螢光(欲表現的蛋白有加螢光基因) 12/01 01:16
4F：→ molkna:有看到螢光，目前重新小量培養看看，但是沒有加glucose下去 12/01 01:17
5F：→ molkna:誘導......不知道這對蛋白產量影響大不大 12/01 01:18
6F：→ cloneting:用YPD養大約36小時glucose用完 不再添加菌雖然不會死掉 12/01 09:52
7F：→ cloneting:但是GAP promoter也不會作用 12/01 09:54
8F：→ littlelizard:要不要用壓片看看 12/02 00:37