作者sonix (嘿嘿)
看板Biotech
標題[求救] Western blot的band會斷裂
時間Thu Sep 3 22:58:45 2009
先附上圖，
http://www.flickr.com/photos/8163301@N06/3884552424/
我是用BioRad的濕式mini-transfer系統，
電流是350-400mA，一個半小時，band的位置大概是34kDa，
令我納悶的是band斷裂(圈起來的地方)的情形不是每次都有（比例算高的），
這是因為有氣泡的關係嗎？
壓完片的membrane用CBR染色的確有些部分band都消失或扭曲了，
可是我已經將membrane和gel間的氣泡都趕走了，
海綿和濾紙那邊的氣泡說真的也看不出來，
另外常常在transfer完後，membrane會變的有點透明（有蛋白質軌跡的地方），
這樣正常嗎？是不是membrane該換了呢？
麻煩高手解答一下，謝謝
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 218.165.129.144
1F：→ qbobo:改成一片100mA,4度C,overnight;或是200mA,4度C,2hr~2.5hr 09/05 21:33
2F：→ qbobo:同樣的跑兩片的話,就把電流double 09/05 21:34
3F：→ sonix:所以這是因為溫度太高的關係？兩片電流需要加倍嗎？看來是 09/05 23:38
4F：→ sonix:串聯啊 09/05 23:38