作者infinityrain (我是可憐蟲>_<...)
看板Biotech
標題[求救] 做cell transfection時vector會插入chromosome嗎?
時間Tue Jun 23 19:55:17 2009
我目前在做cell transfection,並想挑出可以表現目標蛋白的stable clone.
vector用的是pcDNA4/TO/myc-His,而cell則是用293T,
transfect後有一直用抗生素zeocine來做篩選.
我想請問,
在做stable transfection時,外來的vector是否會插進host cell chromosome?
還是說,只會形成episome之類的結構,而不會插入chromosome呢?
我有先用wiki查了一下,
http://en.wikipedia.org/wiki/Transfection405
上面說stable transfection時由於有用selection marker作篩選,
會讓外來基因integrate into host genome,
但我不懂這邊的"integrate into genome"是指會插入至chromosome?
還是說只是維持episome狀態,沒被踢掉而已?
麻煩請解答一下囉~
感激!!
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 203.64.247.93
1F：推 tsubasawolfy:插入吧? 因為表現量會有差 剛transfection完後的幾天 06/23 20:00
2F：→ tsubasawolfy:protein表現量會明顯比stable高 (當然細胞株也有差) 06/23 20:01
3F：推 bigcat24:借標題問 我也想用293T做stable cell-line 但我查了一下 06/24 09:10
4F：→ bigcat24:293T 對G418不敏感 HEK293才敏感 借問要怎麼篩選? 06/24 09:12
5F：推 mckendri:增加G418的濃度 還是可以篩 06/26 02:11
6F：推 ranilla:293T的large T antigen是用G418 selection，再用一次G418 06/26 07:01
7F：→ ranilla:挑的話，應該只是拼運氣吧 06/26 07:02