作者infinityrain (我是可怜虫>_<...)
看板Biotech
标题[求救] 做cell transfection时vector会插入chromosome吗?
时间Tue Jun 23 19:55:17 2009
我目前在做cell transfection,并想挑出可以表现目标蛋白的stable clone.
vector用的是pcDNA4/TO/myc-His,而cell则是用293T,
transfect後有一直用抗生素zeocine来做筛选.
我想请问,
在做stable transfection时,外来的vector是否会插进host cell chromosome?
还是说,只会形成episome之类的结构,而不会插入chromosome呢?
我有先用wiki查了一下,
http://en.wikipedia.org/wiki/Transfection405
上面说stable transfection时由於有用selection marker作筛选,
会让外来基因integrate into host genome,
但我不懂这边的"integrate into genome"是指会插入至chromosome?
还是说只是维持episome状态,没被踢掉而已?
麻烦请解答一下罗~
感激!!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 203.64.247.93
1F：推 tsubasawolfy:插入吧? 因为表现量会有差 刚transfection完後的几天 06/23 20:00
2F：→ tsubasawolfy:protein表现量会明显比stable高 (当然细胞株也有差) 06/23 20:01
3F：推 bigcat24:借标题问 我也想用293T做stable cell-line 但我查了一下 06/24 09:10
4F：→ bigcat24:293T 对G418不敏感 HEK293才敏感 借问要怎麽筛选? 06/24 09:12
5F：推 mckendri:增加G418的浓度 还是可以筛 06/26 02:11
6F：推 ranilla:293T的large T antigen是用G418 selection，再用一次G418 06/26 07:01
7F：→ ranilla:挑的话，应该只是拼运气吧 06/26 07:02