作者Shangju (Pipette戀上吉他)
看板Biotech
標題[求救] 冷凍切片破洞
時間Fri Jun 12 11:30:59 2009
最近切片有小破洞
想請問大家問題出在哪
步驟
0.9% saline perfusion
4% Paraformaldehyde perfusion
4 hours 4% Paraformaldehyde post-fixation
20% Sucrose in KPBS overnight
腦置乾冰上冷凍硬化
放到裝有OCT的鋁箔容器中 黏住底部
OCT灌滿覆蓋整個腦袋
Nissl染色圖
http://home.educities.edu.tw/todo0987/4X.jpg
http://home.educities.edu.tw/todo0987/10X.jpg
http://home.educities.edu.tw/todo0987/20X.jpg
http://home.educities.edu.tw/todo0987/40X.jpg
麻煩大家了 謝謝
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 163.25.91.202
1F：推 sharkzoe:20% sucrose放了多久?可能脫水的時間不夠 06/12 11:37
※ 編輯: Shangju 來自: 163.25.91.202 (06/12 11:38)
2F：→ sharkzoe:建議脫水的步驟要由低濃度到高濃度的sucrose 06/12 11:39
3F：→ Shangju:overnight不夠嗎? 所以有可能脫水不徹底囉 06/12 11:40
4F：→ Shangju:這是實驗室所使用的方法 別人切就沒問題 擔心是其他的問題 06/12 11:43
5F：推 sharkzoe:小空洞大多是固定或脫水的時間不完全，根據你照片上的比 06/12 11:52
6F：→ sharkzoe:例尺來看，固定4hr是沒有問題，所以才會問脫水時間。 06/12 11:52
7F：→ sharkzoe:因為切片的小空洞不是切片刀的問題，排除上述原因，就只 06/12 11:53
8F：→ sharkzoe:剩下可能是sample可能開始腐壞?? 06/12 11:53
9F：→ Shangju:我排除腐敗問題 因為灌流固定脫水隔夜後馬上切片 06/12 12:26
10F：→ Shangju:這下脫水可能性越來越大 真糟!! 06/12 12:27
11F：推 vandia:sucrose不是都用30%的? 06/12 15:09
12F：→ vandia:用30% sucrose浸泡到組織下沉，再置換包埋劑… 06/12 15:11
13F：推 sharkzoe:我常用的是8%=>15%=>20% 前兩者你可以做30min 06/12 20:30
14F：→ sharkzoe:20%的脫水overnight，組織會下沉表示脫水確實(重要!!!) 06/12 20:31
15F：→ Shangju:脫水下沉 確實有見到 06/12 22:33
16F：推 killua1214:6%,2h→12%,2h→18%,2h→24%,2h→30%,O/N 06/12 23:36
17F：→ Shangju:我試試看好了 再跟大家報告 謝謝 06/13 01:47
18F：推 thuglife1020:建議10%一天 30%三天 30%三天 沒破過 06/15 15:15