作者mournermind (阿矇)
看板Biotech
標題[求救] 如何將純化出來的蛋白去磷酸化?
時間Mon May 11 13:22:54 2009
請問大家是如何將純化出來的蛋白去磷酸化的?
小弟現在有一個蛋白在轉譯過程後會被寄主細胞的系統磷酸化
現在我想要把磷酸根拿掉~
依照我的想法:
1.加去磷酸脢 ex: CIAP
那我應該去找哪一家的CIAP? 因為聽說不同家的CIAP去磷酸根的能力不一樣?
那哪一家的產品最好呢?是否有有經驗的版大能夠提供意見的ˊˋ
我已經試了好幾次了..感覺磷酸根都拿不掉...
還是有其他方法呢? 但是前提是不要太暴力...
除理掉磷酸根的蛋白還要繼續拿來作反應..
謝謝大家的幫助 orz
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◆ From: 140.113.173.247
1F：推 su9602:考不考慮用isotope,這樣就不用硬要dephosphorylation? 05/11 14:38
2F：推 tsubasawolfy:做mutation? 05/11 15:57
3F：→ mournermind:我現在要做的實驗就是要比較蛋白去磷酸根前後的變化 05/11 20:46
4F：→ mournermind:所以樓上兩位板大的方法可能不是很適合我.還是謝謝了! 05/11 20:47
5F：推 blence:你的實驗有加入CIP的postive control？問題可能不在CIP有無 05/11 21:10
6F：→ blence:作用,而是你採用的觀察方式無法適用在評估去磷酸化的效果 05/11 21:11
7F：→ mournermind:我的實驗步驟之ㄧ是單純想要把我的蛋白的磷酸根拿掉 05/12 00:37
8F：→ mournermind:我想知道的是 是否有方法去拿掉蛋白的磷酸根~ 05/12 00:38
9F：→ mournermind:就是將蛋白去磷酸根的實驗~在去掉後會以抓磷酸根的 05/12 00:39
10F：→ mournermind:抗體去做偵測確定是否已將磷酸根去除~ 05/12 00:39
11F：→ mournermind:跪求各位前輩...是否有去掉磷酸根的好方法呢? 05/12 00:40
12F：推 su9602:如果是要看活性的話,mutation是可行的,Aln是仿沒有p的form, 05/12 01:16
13F：→ su9602:而Thr是仿有p的form.若非測活性,這個方式就沒用了 05/12 01:18
14F：推 shaline:lambda phosphatase (NEB) 05/12 13:46
15F：→ mournermind:謝謝樓上兩位板大的意見!!我想我去找一下phosphatase 05/13 14:24
16F：→ mournermind:來試試看好了!!感激 orz 05/13 14:24
※ 編輯: mournermind 來自: 140.113.173.247 (05/13 14:25)