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是這樣的~ 我們用TRIzol reagent抽完DNA及RNA 再把抽完DNA留下的上清液繼續抽取protein~ 因為之前已經做過兩次了都沒有什麼問題~ (頂多做完最後一個步驟放進乾浴器裡面overnight隔天早上就溶了) protocal上面本來是寫說加完1% SDS以後放乾浴器30min~1hour就可以了 但可能因為1.5 ml eppendorf的底部比較尖的關係所以需要放比較久 但是禮拜四我們抽了第三批的protein~ 做完以後我們下午放進去乾浴器本來打算當天晚上就去收的 但是去看pellet還沒有溶 好吧那就讓它放到禮拜五早上總會溶了吧!! 但是並沒有... 等到下午三點考完試去看還是沒有!! (好像只有2~3管是有全溶的...) 算一算都放在乾浴器裡面快24小時了....>"< 後來等到禮拜六才去收@@不過還是沒有全溶... 其實我很擔心protein在55~56度的環境裡面太久是不是會denature?? 而且沒有全溶就收(有點像是衛生紙棉絮泡在水裡那種薄薄的塊狀) 以後拿來做western會不會有不良影響? 而且可以幫我判斷有可能是哪個步驟不對嗎?? 學姊初步判斷是我們將pellet拿去air dry的時候沒有dry徹底! 對不起...因為實驗的經驗太少又是低年級 所以很菜不知道問題在哪裡很緊張, 也不知道是否有嚴重性(ex:影響日後實驗) 所以PO上來想各位資深的鄉民賜教摟~~>"< --



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◆ From: 61.58.188.125
1F:→ stanley300:protein會不會放太久啊...早就掛了吧 囧 04/06 00:12
2F:→ iris416:掛了嗎= =那protocal上面寫30min~1hr就不能超過嗎?? 04/06 12:18
3F:推 cocoon121:denature了吧...放那麼久且都是在五六十度C... 04/06 13:09







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