作者YuDavid (討厭失眠)
看板Biotech
標題[求救] IHC 不太順利
時間Mon Mar 30 23:03:02 2009
發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出
以方便板友幫您追蹤問題
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大家好
我們為了觀察CD4+細胞有沒有到特定的部位(我們的實驗是魚類的腸子)
選擇Immunohistochemisrty的方法
希望能順利追蹤到抗原
這幾次實驗 卻總是不太成功想請教一下大家
首先我們是用石蠟切片 把魚類腸道固定後
先deparaffinized by xylene and rehygrate
接下來是做Antigen Retrieval
這一步是我很頭痛的
因為查到的protocol都寫說 用Sodium Citrate buffer 浸泡後拿去加熱
許多人是用微波爐
但是我只要一加熱 可能buffer沸騰的關係 sample都會從slide上脫落
步知道有沒有人發生過類似的問題並且如何解決?
另外 我們是用DAB顯色
加抗體前也會用goat serum做block
濃度是serum/PBS=5%
並且一抗二抗也是用這種濃度的serum按照1:100稀釋
DAB 則是與PBS按照1:20的比例稀世的
然而實驗做完後
細胞核透過hematoxylin染色 還蠻清楚乾淨的
就是沒有DAB顯色後的黃褐色出現
請問我實驗方法有甚麼不妥之處嗎 謝謝大家!
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◆ From: 115.193.174.160
1F：推 soda0:你用的玻片有先coating過嗎?脫臘前烤片可以讓sample貼緊 03/31 22:51
2F：→ YuDavid:有耶 我們是用蛋清 混一些東西 忘了 囧 好像polylysine比 04/01 00:38
3F：→ YuDavid:比較好 但是我之前做HE staining 蛋清效果還可以 04/01 00:39
4F：→ YuDavid:還有我們也有烤片 04/01 00:40
5F：推 allisa:蛋白混甘油吧 效果不錯 04/01 02:27
6F：→ YuDavid:喔喔對 我們就是用這個@@ 04/01 13:54
7F：推 vandia:我記得DAB跟AEC系列的不是都用H2O2來re嘛？ 04/02 13:25