作者cocoon121 (湛藍)
看板Biotech
標題[討論] 關於western blot
時間Sat Feb 14 14:55:12 2009
常常看到有人說 一抗可以室溫兩小時 或是四度C OVERNIGHT
我想請問的是
是怎樣的情況下 可以室溫兩小時
那可以四度C OVERNIGHT三十六小時以上嗎???
之前有聽說好像只有像 GAPDH等之類的才可以室溫下兩小時
最近作WB 有了這些的疑問
特請來請教各位 謝謝
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 211.74.48.145
1F：推 tsubasawolfy:36...overday? 02/14 15:02
2F：→ cocoon121:是的! 02/14 15:12
3F：→ cocoon121:只是好奇可以超過三十六小時嗎@@?因為既然都OVERNIGHT了 02/14 15:15
4F：推 turtle24:我染過40min 跟o/n的沒什麼差別 02/14 15:15
5F：→ cocoon121:請問 四十分鐘是室溫嗎? 02/14 15:23
6F：推 tincta:可以的 只要你壓的蛋白夠穩定，不會因為時間越長而分解 02/14 18:43
7F：→ tincta:基本上有事不能繼續，一直在一抗裡泡著超過一天是OK的 02/14 18:45
8F：→ tincta:室溫一小時通常是鍵結很強的抗體，例如actin，趕時間會這樣 02/14 18:46
9F：→ tincta:用，其實一抗趕時間可以室溫3hr，只是這樣稀釋的抗體會因為 02/14 18:47
10F：→ tincta:室溫過久而產生雜菌，會出現雜band，不能reuse太多次這樣 02/14 18:48
11F：→ cocoon121:喔喔 了解 謝謝!! 02/14 20:10
12F：推 phyton:一搬來說我都是做 1hr @RT 因為這樣當天就可以知道結果 02/16 06:09
13F：→ phyton:但是當排時間的時候也是 O/N 甚至過週末也在作XD 02/16 06:09
14F：→ phyton:泡久的畫像上面tincta大說的怕生雜菌(牛奶會酸掉)要冷藏 02/16 06:10
15F：→ phyton:不過還是儘量不要放超過一天啦，pH 如果變酸抗體會掉下來 02/16 06:11
16F：推 boblu:NaN3是大家的好朋友 02/17 04:34
17F：→ boblu:不過二抗要用 HRP 的話, wash 要很徹底 02/17 04:34