作者loneangle (孤光天使)
看板Biotech
標題[求救] PCR 為你而P
時間Fri Jan 23 10:52:19 2009
我要P一個蛋白的rna
我的cell line ratio 2點多
然後 我的actin 和 另一種蛋白的rna
都p的出來
唯獨我最近要做的都做不出來
之前還可以 最近新買的primer（序列一樣）就做不出來了
整條是模糊的（應該就是什麼大小的片段都有 整條糊的）
步驟沒有改過 就是
1.94度 1分鐘
2.57度 1分鐘
3.72度 1分鐘
兩個cycle
4.94度 1分鐘
5.65度 1分鐘
6.72度 1分鐘
41個cycle
這是由paper看來的
請問 還有什麼可以改嘛 還是ratio 一定要在1.8~2.0才可以阿
另外 之前可以P的出來的時候 RT的步驟的加熱 我們家的機器加熱蓋沒有啟動
這樣 還P的出來 ＝＝
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◆ From: 140.128.67.249
1F：推 fosca:RT PCR?? 01/23 11:29
2F：推 beowulfo:試著 +5% DMSO或是touchdown PCR看看能不能跑出來 01/23 11:53
3F：→ beowulfo:我個人絕得可能是primer沒有work.. 01/23 11:54
4F：→ loneangle:DMSO的作用是？ 我比較疑問 那兩個cycle的用意是？ 01/23 12:01
5F：推 aggaci:加betaine 或 換機器 或 換enzyme 做做看 01/23 12:32
6F：推 sunnyting:上蓋沒加熱 管內水分蒸發 RT反應體積改變 01/23 13:01
7F：→ sunnyting:換新primer的廠商有變嗎? 其實我也比較同意b大第二行 01/23 13:03
8F：推 autotroph:貼個電泳照片 會比較容易發現問題 01/23 16:39
9F：推 yadayada:什麼是"為你而P"? 01/23 20:11
10F：推 allure1:回樓上 那是梁靜茹以前的歌 01/26 19:07
11F：→ feng760804:每個廠商做的PRIMER都不盡相同 根據經驗 給一樣的序列 01/30 17:18
12F：→ feng760804:做出來的狀況千奇百怪 甚麼情形都會出現 01/30 17:19
13F：推 lucidol:DMSO, Glycerol, betaine可以穩定反應進行改善PCR效率 02/04 18:16