作者irongal (!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!)
看板Biotech
標題[求救] double digest
時間Wed Nov 26 03:44:37 2008
我要進行 HindIII 和 BamHI 的 double digest
根據 New Engalnd Biolabs (NEB),
HindIII 用 NEB 2 Buffer
BamHI 用 NEB "U" Buffer
NEB 有加以附註
這兩個 enzymes 不適合 double digestion.
要進行 sequential digestion.
請問有人做過 HindIII 和 BamHI 的 double digest 嗎?
可以大略解釋為何 NEB 有這樣的註明?
我有注意到:
1. BamHI 用 NEB 2 Buffer 的 efficiency 是 100%
2. HindIII 用 NEB "U" Buffer 的 efficiency 是 10%
問題:
1. 如果 BamHI 在 NEB 2 Buffer 中有 100% efficiency,
為何還需要用特殊的 NEB "U" Buffer?
2. 我可以理解如果 double digest 在 NEB "U" Buffer 中進行,
HindIII 可能會切不好 (畢竟才 10% 而已).
那如果我用 NEB 2 Buffer 呢?
3. 還是說, 除了 buffer 相容性以外,
還有一些特殊理由這兩個 enzymes 一定要進行 sequential digest?
謝謝大家所能提供的建議 :)
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 130.189.202.86
1F：推 afunafun:我查BamHI是建議用 buffer2 並且有註明 dd 11/26 12:13
2F：→ afunafun:dd指 若要double digest請用buffer3 可減少star activity 11/26 12:15
3F：→ afunafun:不過HindIII 只適合在buffer2 所以建議就分開切 11/26 12:16
4F：推 blence:舊的NEB chart的確用U,我們lab有還有,但新的都改成buffer 3 11/26 14:33
5F：→ blence:對於BamH1的描述與使用,請參考NEB網站會有說明 11/26 14:35
6F：→ irongal:tks!! 11/27 01:39