作者irongal (!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!)
看板Biotech
标题[求救] double digest
时间Wed Nov 26 03:44:37 2008
我要进行 HindIII 和 BamHI 的 double digest
根据 New Engalnd Biolabs (NEB),
HindIII 用 NEB 2 Buffer
BamHI 用 NEB "U" Buffer
NEB 有加以附注
这两个 enzymes 不适合 double digestion.
要进行 sequential digestion.
请问有人做过 HindIII 和 BamHI 的 double digest 吗?
可以大略解释为何 NEB 有这样的注明?
我有注意到:
1. BamHI 用 NEB 2 Buffer 的 efficiency 是 100%
2. HindIII 用 NEB "U" Buffer 的 efficiency 是 10%
问题:
1. 如果 BamHI 在 NEB 2 Buffer 中有 100% efficiency,
为何还需要用特殊的 NEB "U" Buffer?
2. 我可以理解如果 double digest 在 NEB "U" Buffer 中进行,
HindIII 可能会切不好 (毕竟才 10% 而已).
那如果我用 NEB 2 Buffer 呢?
3. 还是说, 除了 buffer 相容性以外,
还有一些特殊理由这两个 enzymes 一定要进行 sequential digest?
谢谢大家所能提供的建议 :)
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 130.189.202.86
1F：推 afunafun:我查BamHI是建议用 buffer2 并且有注明 dd 11/26 12:13
2F：→ afunafun:dd指 若要double digest请用buffer3 可减少star activity 11/26 12:15
3F：→ afunafun:不过HindIII 只适合在buffer2 所以建议就分开切 11/26 12:16
4F：推 blence:旧的NEB chart的确用U,我们lab有还有,但新的都改成buffer 3 11/26 14:33
5F：→ blence:对於BamH1的描述与使用,请参考NEB网站会有说明 11/26 14:35
6F：→ irongal:tks!! 11/27 01:39