作者cdkcyclin (在這裡)
看板Biotech
標題[求救] 請幫我看一下Western的圖
時間Sun Nov 9 17:34:31 2008
http://cdkcyclin.pixnet.net/album/photo/103949719
這是我的Wetsern圖
我想要看的protein是HIF-1 alpha(120kD)
所使用的SDS page是10%
transfer 3hr,75V,4度
1Ab,1:1000,O/N,4度
2Ab,1:5000,2hr,室溫
我這次的定量有點不準
但是我比較苦惱的是HIF-1的band看起來不太均勻
尤其是最右邊的sample 深淺不一的很嚴重
請問可能是哪裡有問題呢?
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 118.160.31.74
※ 編輯: cdkcyclin 來自: 118.160.31.74 (11/09 17:35)
1F：推 Nikio:恩 好怪～你controls 看起來沒這些問題耶 @@ 11/09 23:43
2F：推 sGoat:請問是wet還是semi-dry transfer?最右邊的lane有點拖尾 11/10 00:22
3F：→ cdkcyclin:是wet 11/10 12:25
4F：推 sGoat:有可能是PAGE時出的問題,造成sample拖尾 11/10 16:45
5F：→ sGoat:解決辦法是sample loading時把上清部份混勻一下再加進去 11/10 16:46
6F：→ sGoat:還有跑膠時避開最左右的lane,盡量用中間的比較不會有問題 11/10 16:48
7F：→ cdkcyclin:謝謝你的意見 我會參考 11/12 22:15