作者goodfish700 (呼嚕~~~呼嚕~~~)
看板Biotech
標題[方法] 用 96-well 培養盤做 Yeast-two hybrid？
時間Sat Oct 18 02:14:50 2008
大家好
敝人現在在以 yeast-two hybrid 的方法
進行將近 200 個 viral ORF 的 interaction 分析
目前的實驗方法是把轉型過的 yeast
用 replica plating 的方式
由 YPD (agar plate)
轉到 -Leu / -Trp (agar plate)
轉到 -Ade / -His / -Leu / -Trp / X-alpha-gal (agar plate) 上
原理看來簡單
但問題在於我要篩選的 ORF 有將近 200 個 orz
這樣子每個禮拜做 plate 不說（各種配方的 plate 一個禮拜要做四十個）
最累的是一開始酵母菌養好以後
要用 pipetman 把一個一個 drop（菌液）點在 plate 上，形成陣列
一盤 48 個，一個 ORF 要用掉 5 盤，一個禮拜做 8 個 ORF
所以一次要點 40 盤，總共點快 2000 滴菌液
加上 mating 的話，這個動作要重複一次
所以滴菌液要達到快 4000 滴
一天之內要做完這件事
但養出來的酵母菌在做呈色判讀時，因其 colony 大小和顏色差異
多少會造成判讀上的困擾
比如說一坨 colony 中有部分藍色部分白色
或是一群 colony 中有的藍有的白
曾在某研討會中看到有研究生用液態培養基做 yeast-two hybrid
菌是養在 96-well 培養盤裡的
當時沒有記下該實驗室的老師名字
現在覺得自己應該需要用到 96-well 培養盤做 yeast-two hybrid 的技術
和老闆討論後老闆也覺得可以一試
但他手邊沒有這樣的 protocol
建議我先查查看網路哪邊有
我查過網路，目前都是查到用 agar plate 在做 yeast-two hybrid 的
不知有沒有同行知道哪邊有人用 96-well 培養盤進行 yeast-two hybrid 的呢？
用培養皿做 genomic screen 實在太費工了..... orz
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◆ From: 220.132.126.121
※ 編輯: goodfish700 來自: 220.132.126.121 (10/18 02:17)
1F：推 ad1980:你還記得那位研究生養在 96-well 裡是用 a-gal or b-gal 10/19 07:29
2F：→ ad1980:嗎？我現在也面臨跟你一樣的困擾，但我要 screen 的更多 10/19 07:29
3F：→ ad1980:如果能用 96-well 的話，it will make my life a lot 10/19 07:31
4F：→ ad1980:easier.... 10/19 07:31
5F：推 tsubasawolfy:印象中是中研院某位碩班發明的 後來他畢業後就靠這 10/19 08:53
6F：→ tsubasawolfy:技術到太平洋對岸去...(by上課印象) 10/19 08:53
7F：推 oplz:是誰的課呀? 10/19 13:05
8F：→ goodfish700:當初研討會只有提yeast-two hybrid 沒有說用a還是b... 10/19 22:01
9F：推 ad1980:i see, thanks. 看來我需要自己試了.... 10/21 10:20