作者goodfish700 (呼噜~~~呼噜~~~)
看板Biotech
标题[方法] 用 96-well 培养盘做 Yeast-two hybrid？
时间Sat Oct 18 02:14:50 2008
大家好
敝人现在在以 yeast-two hybrid 的方法
进行将近 200 个 viral ORF 的 interaction 分析
目前的实验方法是把转型过的 yeast
用 replica plating 的方式
由 YPD (agar plate)
转到 -Leu / -Trp (agar plate)
转到 -Ade / -His / -Leu / -Trp / X-alpha-gal (agar plate) 上
原理看来简单
但问题在於我要筛选的 ORF 有将近 200 个 orz
这样子每个礼拜做 plate 不说（各种配方的 plate 一个礼拜要做四十个）
最累的是一开始酵母菌养好以後
要用 pipetman 把一个一个 drop（菌液）点在 plate 上，形成阵列
一盘 48 个，一个 ORF 要用掉 5 盘，一个礼拜做 8 个 ORF
所以一次要点 40 盘，总共点快 2000 滴菌液
加上 mating 的话，这个动作要重复一次
所以滴菌液要达到快 4000 滴
一天之内要做完这件事
但养出来的酵母菌在做呈色判读时，因其 colony 大小和颜色差异
多少会造成判读上的困扰
比如说一坨 colony 中有部分蓝色部分白色
或是一群 colony 中有的蓝有的白
曾在某研讨会中看到有研究生用液态培养基做 yeast-two hybrid
菌是养在 96-well 培养盘里的
当时没有记下该实验室的老师名字
现在觉得自己应该需要用到 96-well 培养盘做 yeast-two hybrid 的技术
和老板讨论後老板也觉得可以一试
但他手边没有这样的 protocol
建议我先查查看网路哪边有
我查过网路，目前都是查到用 agar plate 在做 yeast-two hybrid 的
不知有没有同行知道哪边有人用 96-well 培养盘进行 yeast-two hybrid 的呢？
用培养皿做 genomic screen 实在太费工了..... orz
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◆ From: 220.132.126.121
※ 编辑: goodfish700 来自: 220.132.126.121 (10/18 02:17)
1F：推 ad1980:你还记得那位研究生养在 96-well 里是用 a-gal or b-gal 10/19 07:29
2F：→ ad1980:吗？我现在也面临跟你一样的困扰，但我要 screen 的更多 10/19 07:29
3F：→ ad1980:如果能用 96-well 的话，it will make my life a lot 10/19 07:31
4F：→ ad1980:easier.... 10/19 07:31
5F：推 tsubasawolfy:印象中是中研院某位硕班发明的 後来他毕业後就靠这 10/19 08:53
6F：→ tsubasawolfy:技术到太平洋对岸去...(by上课印象) 10/19 08:53
7F：推 oplz:是谁的课呀? 10/19 13:05
8F：→ goodfish700:当初研讨会只有提yeast-two hybrid 没有说用a还是b... 10/19 22:01
9F：推 ad1980:i see, thanks. 看来我需要自己试了.... 10/21 10:20