作者catsheep (幼幼貓變小天使)
看板Biotech
標題[討論] 細胞轉染步驟
時間Wed Oct 15 17:25:20 2008
我最近再做利用載體將EGFP-DNA轉染進細胞裡
參考了一下我學長的論文步驟
1.將EGFP-DNA與載體和DMEM混合 40分鐘 (使用的載體為奈米磁性流體)
2.將步驟一的載體-DNA complex餵入HeLa細胞
培養3.5小時
3.用PBS清洗三次 加入1ml medium 培養48 hr
4. 加入福馬林 靜置5 mins
5. 之後的步驟就是做confocal microscopy試片的步驟
可以請有經驗的人幫我看看步驟有沒有甚麼問題嗎??
因為學長寫得很簡單 很多細節都沒寫出來
另外我有幾個問題
1. EGFP-DNA是保存在-20oC下 拿出來用時要先解凍嗎??
如果是要在37oC下回溫 那可以在室溫下放多久 而不會壞掉
2. EGFP-DNA與載體混合 可經由震盪混合
那強度是不是不能太強 要震盪多久??
之後靜置40 mins是在室溫下就可以嗎??
3.我所使用的是HeLa細胞 通常不都是需要用一天時間讓他貼壁
步驟25中 載體-DNA complex 餵入細胞後只培養3.5小時
有辦法讓DNA進入細胞嗎??
謝謝
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◆ From: 140.114.44.75
1F：推 blence:載體？這些東西都有名有姓,請直接上原廠網站查詢technical 10/15 17:30
2F：→ blence:mannul,畢竟學長不一定對,而且既有操作流程太簡單無法參考 10/15 17:32
※ 編輯: catsheep 來自: 140.114.44.75 (10/15 20:16)