作者catsheep (幼幼猫变小天使)
看板Biotech
标题[讨论] 细胞转染步骤
时间Wed Oct 15 17:25:20 2008
我最近再做利用载体将EGFP-DNA转染进细胞里
参考了一下我学长的论文步骤
1.将EGFP-DNA与载体和DMEM混合 40分钟 (使用的载体为奈米磁性流体)
2.将步骤一的载体-DNA complex喂入HeLa细胞
培养3.5小时
3.用PBS清洗三次 加入1ml medium 培养48 hr
4. 加入福马林 静置5 mins
5. 之後的步骤就是做confocal microscopy试片的步骤
可以请有经验的人帮我看看步骤有没有甚麽问题吗??
因为学长写得很简单 很多细节都没写出来
另外我有几个问题
1. EGFP-DNA是保存在-20oC下 拿出来用时要先解冻吗??
如果是要在37oC下回温 那可以在室温下放多久 而不会坏掉
2. EGFP-DNA与载体混合 可经由震荡混合
那强度是不是不能太强 要震荡多久??
之後静置40 mins是在室温下就可以吗??
3.我所使用的是HeLa细胞 通常不都是需要用一天时间让他贴壁
步骤25中 载体-DNA complex 喂入细胞後只培养3.5小时
有办法让DNA进入细胞吗??
谢谢
--
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.114.44.75
1F：推 blence:载体？这些东西都有名有姓,请直接上原厂网站查询technical 10/15 17:30
2F：→ blence:mannul,毕竟学长不一定对,而且既有操作流程太简单无法参考 10/15 17:32
※ 编辑: catsheep 来自: 140.114.44.75 (10/15 20:16)