作者miminin (等待)
看板Biotech
標題[求救] protein表現量的問題
時間Thu Jul 17 23:53:54 2008
想請問一下
我目前是使用E.coli的表現系統來製造我的蛋白質
方法是(1)5ml先在37度下養16小時
然後 (2)做四十倍稀釋在三十七度下養一個小時
(3)加入阿拉伯糖在三十七度下養六個小時
這種情況下發現某幾個突變種蛋白質的表現量很低(幾乎沒有)
目前嘗試將(2)改為四個小時(3)改為二十五度十五個小時
但是問題似乎沒有解決
不知道各位前輩有什麼方法可以提高蛋白質的表現量嗎?
先跟各位說聲謝了~
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◆ From: 163.24.253.102
1F：推 alaric:Expression Time Course ? 07/18 00:30
2F：推 mtdas:什麼strain和vector? 07/18 01:01
3F：→ miminin:時間或溫度可以怎麼調整呢? 07/18 03:00
4F：→ miminin:我的vector是GFPuv 要表達的protein是GFP 07/18 03:04
5F：推 milkpa:是BAD promoter嗎？L-ara加多少？誘導後生長速率有無下降？ 07/18 08:30
6F：→ milkpa:GFPuv基本上不太影響host，隨便都可以生產一堆..... 07/18 08:32
7F：→ milkpa:就算插到chromosome上，用T7 promoter驅動還是爆綠..... 07/18 08:33