作者miminin (等待)
看板Biotech
标题[求救] protein表现量的问题
时间Thu Jul 17 23:53:54 2008
想请问一下
我目前是使用E.coli的表现系统来制造我的蛋白质
方法是(1)5ml先在37度下养16小时
然後 (2)做四十倍稀释在三十七度下养一个小时
(3)加入阿拉伯糖在三十七度下养六个小时
这种情况下发现某几个突变种蛋白质的表现量很低(几乎没有)
目前尝试将(2)改为四个小时(3)改为二十五度十五个小时
但是问题似乎没有解决
不知道各位前辈有什麽方法可以提高蛋白质的表现量吗?
先跟各位说声谢了~
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 163.24.253.102
1F：推 alaric:Expression Time Course ? 07/18 00:30
2F：推 mtdas:什麽strain和vector? 07/18 01:01
3F：→ miminin:时间或温度可以怎麽调整呢? 07/18 03:00
4F：→ miminin:我的vector是GFPuv 要表达的protein是GFP 07/18 03:04
5F：推 milkpa:是BAD promoter吗？L-ara加多少？诱导後生长速率有无下降？ 07/18 08:30
6F：→ milkpa:GFPuv基本上不太影响host，随便都可以生产一堆..... 07/18 08:32
7F：→ milkpa:就算插到chromosome上，用T7 promoter驱动还是爆绿..... 07/18 08:33