※ 引述《albertwang (會思考的魚)》之銘言： : ※ 引述《linker0726 (哀..煩阿)》之銘言： : : http://clincancerres.aacrjournals.org/cgi/content/full/12/1/43 : : 我看了這篇文章 : : 有一個地方很不解 : : 就是他Fig. 2跑Gel時確認時，本來WT的不是已經用限制酶切過了(配合Fig. 1) : : 應該是會斷成好幾個片段(應該是兩個) : : 為什麼到這邊就變原來的一段了呢~? : : 註:WT分別是A圖的138bp和B圖的130bp : : 感謝 : 首先我在對全部基因的seq時發現一件事情 : paper上的enon跟NCBI genebank不同剛好跳一下 : 在 paper 在 NCBI : exon19 等於 EXON21 : exon21 等於 EXON23 : 這是一件粉神奇的事情 : 一開始我以為是isoform : 但是剛剛再卻確認一次(不過有可能我太累了 有高手幫指正) : 還是一樣 : 再來你的疑問 : 這不困難重點在他的primer設計 : NC_000007.這是基因的代號NCBI的 : EXON 21 : ATCCCAGAAGGTGAGAAAG(aTAA)AATTCccgtcgctatcaaggaattaagagaagcaacatctccgaaagccaaca : aggaaatcctcgatgtgagtttctgctttgctgtgtgggggtccatggctctgaacctcagg : EXON23 : cagccaggaacgtactggtgaaaacacCGCAGCATGTCAAGATCACAGATtttgggc(tggcca)aactgctgggtgc : ggaagagaaagaataccatgcagaaggaggcaaagtaaggaggtggctttaggtcagcc : AGCATTTTCCTGACACCAGGGA : 大寫部分是primer : ()部分是限制每 : 他對限制脢改變所以pcr結果會出現圖2 : 至於圖1陷阱需要看實驗方法才能董 : 這你就自己讀一下囉 : 呵呵加油 圖一有陷阱? 其實我看不懂圖一最後Wild的畫法 好幾條虛線代表什麼? 而且跑完第一次PCR用限制酶切後 到底第二次PCR時會不會再放大 它好像也沒講到 我覺得圖二應該跟圖一之後無關 他只是要測它的敏感度 所以用WT下去稀釋 直接下去跑PCR 然後用同樣的限制酶切 這邊看來 好像第一次PCR完用限制酶切 之後好像會在黏回去? 不過不知道會不會再放大? --

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