作者alienwhale (Dear John letter)
看板Biotech
標題clone很多次都沒有成功---求救
時間Sun May 11 22:37:45 2008
最近在cloning 作了很多次都沒有成功
我的vector size 是9kb
insert size 是300bp
RE 是用 BsiwI 和 DraIII
試了好幾次 就是沒有成功
想請問一下 各位大大 有什麼建議 感謝
我的比例1:3 1:5 都用過了
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如果愛情像一部電影
你會選擇看清楚沿途的風景
還是有一個你所想要的ending...
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 59.112.169.238
1F：推 intotheman:大小差距蠻懸殊 確定Enzyme都有切動 insert用到10看看 05/11 23:58
2F：推 yaliu:如果都有切動，有時候可能是ligation失敗吧 05/12 00:59
3F：→ yaliu:確認看看ligase和ligase buffer有沒有問題 05/12 00:59
4F：→ ckshmin:ATP 也很重要唷 05/12 22:46
5F：推 newbeetle:DNA total < 30 ng 有時候放太多去接反而接不動 05/13 11:36
6F：推 inchew:1:15或1:20試試，我的I:V=150b:9K用這比例有成功 05/17 05:06