作者Doser7 (豆)
看板Biotech
標題[求救]請問病毒純化方法
時間Sun May 4 23:44:24 2008
小弟目前純化病毒不太順利
想請問各位大大有關病毒純化的方法
我是用CSCl不連續密度梯度離心法 純化細胞內的病毒顆粒
將CSCl溶於TNE內 以40% 4ml, 30% 3ml, 20% 2ml
利用5ml塑膠管逐步沿著管壁加入離心管內
1,請問各位在拉梯度時是用什麼器具將CSCl注入離心管內?
我是先加高濃度在逐次往上加低濃度
但書上大多寫先加低濃度再加高濃度於低濃度下，將低濃度往上推
2.是否一定要拉出40% 30% 20%間有明顯界線呢?(避免各層間混合)
3.當CSCl不連續梯度拉完後，是否須馬上在頂部加入待離病毒液呢?
4.當離心時間很久會不會將待測物離過頭呢?(跑到離心管底部)
5.如果改用”等密度”梯度離心是否更適合呢?
因為看了很多網路資料有太多方式不知如何擇一
想請問板上各位大大的經驗分享，先謝謝大家囉
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◆ From: 59.112.128.236
1F：推 rivis:1. 都可以，看你方便 2.3.4.是一樣的問題，CsCl經長時間 05/06 11:46
2F：→ rivis:離心，其實就會形成gradient，病毒自然會落在你想要的分層 05/06 11:47
3F：→ rivis:請較詳細說出你遇到的問題，不然不知道該如何幫你 05/06 11:48
4F：推 haleywen:我做分層是先放最輕的，然後從最下面依序放入其他層，但 05/08 23:23
5F：→ haleywen:是，要小心放其他層時不要有泡泡，吐到剩下一點時要停 05/08 23:24
6F：→ haleywen:不過做不同病毒有不同方法，查一下你的病毒適用的梯度 05/08 23:26