作者dropdred (keep the faith)
看板Biotech
標題Re: [求救]PCNA及Ki67的IHC
時間Sun May 4 09:27:30 2008
※ 引述《adamjr (hgd)》之銘言：
: 請問
: 有人做過這兩個抗體的組織染色嗎？
: 我用ab cam的都染不出來耶！
: 可否請有經驗的人分享一下呢？
: 或是有人做過B6的脾臟免疫染色？
: 這個組織本身好染嗎？
: 求求各位幫忙，謝謝!
我不是原po
但是最近用DAKO 染Ki67(MIB-1)也是染不出來
染的是neurofibroma
以下我只列出protocol中比較可能做變動的部分
在target retrieval的部分是用DAKO target retrieval buffer pH9
在水浴槽隔水加熱煮20min
1抗(1:100) 4度C O.N.
DAB呈色 10min→但是完全沒有顏色,後來在補染5min,還是沒有
那一次同時染另外一支抗體,所以我很確信該加的我都有加
因為另外一支有染出來
因為1抗的部分已經是O.N.
DAB呈色的部分似乎也沒有帶大的改善
所以覺得target retrieval的部分似乎是要調整
想請教有染過Ki67的各位在target retrieval都怎麼處理??
謝謝大家...
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 61.229.225.120
1F：推 tiresome:加H2O2步驟處理?? 05/04 23:47
2F：→ tiresome:有的熱處理我會用autoclave 05/04 23:49
3F：→ dropdred:0.3% H2O2 10min 05/05 19:04
4F：→ dropdred:是有想過,但擔心tissue剝落 05/05 19:05
5F：推 tiresome:擔心剝落片子切完要用oven烘乾一下 05/06 09:12
6F：→ tiresome:另外看是不是脫蠟不完全,Xylin Alc有時失效沒發現 05/06 09:13
7F：→ tiresome:臘沒脫完全也可能會抗體上不去 05/06 09:14
8F：→ tiresome:最後 可能 抗體壞了........... 05/06 09:15
9F：→ dropdred:是有的,切完37度ON..但還是有些切片會有剝落的情形 05/06 18:00
10F：→ dropdred:送切片室切的..所以品質我沒法掌控.... 05/06 18:03
11F：→ dropdred:謝謝~我會在試試看的... 05/06 18:04