作者beautyfish (天使光)
看板Biotech
標題[求救] Southern 背景值過深
時間Sat May 3 15:42:16 2008
最近很常問Southern的問題 因為實在有點走投無路了TT
之前好不容易有做出Southern
但最近又要做另外一批的數據
用的buffer都跟以前一樣 只是溫度改成65度 之前是用55度 因為片段的相似性比較低
可是這次做出來的結果都很奇怪
背景值很深 Sample的區域反白
我們家用的CDP-star是NEB的
之前用的酵素太久 所以買新的 可是我同學用了都有做出來
除此之外沒有改變其他東西
但是壓片半小時之後出來的都是黑呼呼的一片
我洗片的時間已經比protocol上所標示的時間延長了
實在想不出來是為了什麼原因
請板上的大大幫忙
非常的感謝
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在大海中泅泳的魚
你會不會也想要像飛鳥一樣翱翔
還是心甘情願的待在你的 水藍色天堂
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.196.22
1F：推 yaliu:wash時的溫度呢？？ 我通常都用0.5XSSC在68度wash兩次 05/03 19:19
2F：→ yaliu:背景超乾淨....不過我是用NBT/BCIP來顯色啦，不是用壓片 05/03 19:23
3F：推 ROKEE:貼圖上來大家瞧瞧吧..... 05/03 20:48
4F：→ beautyfish:我也有用0.5X SSC在65度wash兩次 但還是一樣的髒 TT 05/04 10:34
5F：推 Remin:可以改probe的序列嗎？ 另外請問blocking buffer 05/05 15:15
6F：→ beautyfish:因為我是要針對我的INSER去做HYBRIDIZATION 所以應該無 05/05 15:34
7F：→ beautyfish:法更改probe，Blocking solution處有什麼問題嗎 05/05 15:34
8F：推 Remin:以前blocking含有ssDNA 溫度用37度1hr，蠻乾淨的 05/06 12:46