作者zeratul1396 (薩加利亞)
看板Biotech
標題[求救] 蛋白質透析完沉澱了......
時間Tue Apr 29 16:47:38 2008
小弟的最近再做酵素的功能分析
打算用低鹽濃度做測試(之前是用高鹽)
所以我先用透析膜將蛋白質由原先的buffer
Tris-20mM NaCl-300mM imidazole-200mM
透析到
Tris-20mM NaCl-20mM
然後
蛋白質就全部沉澱了
我試著離心以後取上清液來測量濃度
只剩下150 ng/ul左右
之後
我試著兩次透析 先透析到中鹽 150mM 再到低鹽 20mM
結果還是一樣
請問
各位前輩有什麼方法可以幫我解決這個問題呢?
感激不盡 謝謝
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滾!
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◆ From: 140.114.98.221
1F：推 rnoptrjq:有試過在透析中加beta-mercaptoethanol or DTT嗎？ 04/29 22:52
2F：推 aggaci:很好奇 為啥要加？打斷雙硫鍵？ 04/30 01:33
3F：推 rnoptrjq:使用高濃度時可以打斷雙硫鍵，相反低濃度時可以穩定蛋白 04/30 12:47
4F：推 wulala1995:imidazole濃度不能一次降到0,要慢慢降..200/100/50/0 05/01 00:54
5F：→ wulala1995:這樣應該就能解決你沉澱的問題 05/01 00:55
6F：→ zeratul1396:恩~謝謝各位 那我試試看了 05/01 19:17
7F：推 pupuwu:推慢慢降喔~ 時間間隔最好超過兩個小時 05/10 03:20