作者leoblack (朋友看太重的猫)
看板Biotech
標題Re: [求救] SYPRO Ruby染色問題!?
時間Tue Apr 29 00:32:52 2008
: ◆ From: 140.127.160.142
: 推 leoblack:用reuse的Sypro Ruby真的會有色素沈澱~換新的就ok了 04/28 15:17
: → leoblack:我們家作CoIP也是用Sypro Ruby染色~每次都會用新的 04/28 15:18
: → leoblack:另外,我們都會包頭巾帶手套口罩,減少灰塵跟keratin的沾粘 04/28 15:18
: → leoblack:如果還是不能改善~恐怕得從"配膠跑膠"那邊下手,想辦法用 04/28 15:19
: → leoblack:乾淨一點的Q水or buffer來配~fix時也用乾淨的盒子盛裝~ 04/28 15:20
: → NightAmades:我用新的也是會有胡椒顆粒~>"< 04/28 22:04
: → NightAmades:盒子都會用洗乾淨的盒子..buffer也是用二次水配 04/28 22:04
: → NightAmades:嗯...會試試看戴頭巾..及口罩 04/28 22:05
: → NightAmades:不過...染的時候用微波爐的方式跟O/N 哪個比較好!? 04/28 22:07
: → NightAmades:看產品protocol說用微波爐會比較少胡椒顆粒~ 04/28 22:08
: → NightAmades:再請問leo大..您都完全不會出現胡椒顆粒嗎? 04/28 22:10
: → NightAmades:不知道SYPRO Ruby的廠牌會不會有影響!?...我用萊富的~ 04/28 22:11
我不敢說"完全沒有胡椒顆粒"
但是我會盡可能地想辦法減少
http://www.wretch.cc/album/show.php?i=leowind&b=2&f=1091764481&p=1
但是我看不懂什麼是微波爐?!^^"
我們家是將CoIP後的band跑1D膠後
將我們所要的band切下來,要去送LC/MS/MS
所以有沒有東西沾粘上PAGE對我們而言很重要
所以我們會用乾淨的容器盛裝(如裝6 well dish的塑膠盒)
以保鮮膜罩著,然後fix(40%MtOH+10%Acetate)跟wash(Q水)
染Sypro Ruby時會在4℃ o/n(怕protein degrade)
要確定PAGE在裡面可以自由滑動,且不會接觸到保鮮膜,也不會"擱淺"
不然一樣會有色素沈澱
等染完後會用Q水再wash一次,然後再用fix buffer destain
再用Q水wash 2次,換乾淨的Q水後放於4℃冰箱
我們家invetrogen跟sigma的都有在用,效果都還ok~
使用前不會特別濾過或什麼的~就直接倒來用了~
希望這樣講對你來說有幫助~^^"
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◆ From: 140.109.40.22
1F：推 NightAmades:嗯!微波爐染法是SYPRO Ruby快速染膠方式 04/29 10:03
2F：→ NightAmades:具產品所提供的protocol及說明..是說可以減少背景 04/29 10:04
3F：→ NightAmades:和胡椒顆粒 04/29 10:05
4F：→ NightAmades:嗯!我看了您的圖..我染的好的時候差不多像這樣或更好 04/29 10:06
5F：→ NightAmades:所以是無法避免嗎?因為用其他染色方式不會有胡椒顆粒 04/29 10:07
6F：→ leoblack:個人覺得"PAGE不要擱淺"和"不要有異物接觸(如保鮮膜沾粘) 04/29 13:49
7F：→ leoblack:都可以改善很都~不過似乎不能"完全避免",有考慮改銀染嘛? 04/29 13:50
8F：→ leoblack:像我要印在論文裡的圖就會改用銀染,但作實驗時用Sypro染 04/29 13:51
9F：推 NightAmades:我應該不會考慮銀染...因為需要挖點以及比較差異 04/29 17:18
10F：→ NightAmades:所以銀染所帶來的多變異性是讓我不考慮進去的原因 04/29 17:19