作者bunman ()
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標題Re: [求救] Nested PCR
時間Sun Apr 27 17:58:09 2008
※ 引述《fgyfgy (fgyfgy)》之銘言：
: 時間: Sun Apr 27 12:12:57 2008
: 最近看一篇PAPER
: 介紹nested PCR能提高sensitivity和specificity
: 文中附一張圖
: 將first PCR 和 nested PCR的產物跑電泳
: 但first PCR跑出的電泳卻無結果產生
: 只有 nested PCR 有結果
: 我把first PCR沒有結果解釋成因為它的specificity不高
: 所以電泳跑不出來
: 不知道對不對
: 希望版眾能幫我解除疑惑
: 謝謝
我認為你說的專一性不高是原因之一
但最主要的應該是first PCR所用的DNA中之目標片段濃度太低
所以產物相對少 少到電泳看不到也還算正常
後續將first PCR產物稀釋再進行nested PCR確實對於專一性以及產物放大有實質幫助
這是我自己本身的經驗
有錯還請大家指正
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.60.67
1F：推 elgase:you got it! 04/28 11:21
2F：推 yaliu:想請問，如果再拿同組primer進行第二次PCR是可行的嗎？ 04/29 00:29
3F：→ yaliu:好像沒做成功過...原理來說應該是沒問題吧？！ 04/29 00:32
4F：→ yaliu:還是我技術有問題= = 04/29 00:33
5F：→ bunman:可以啊...那叫做booster PCR 第一次產物記得稀釋... 05/03 13:29