作者kakaman (日子過的真快阿)
看板Biotech
標題Re: [求救] 2D真難搞
時間Sun Apr 27 15:04:30 2008
※ 引述《kakaman (日子過的真快阿)》之銘言：
: 做了好幾遍
: 出現的狀況都一樣
: 就是點很少 超極少... 少到不敢拿給老師看...
: 查了2D的trouble shooting
: 發現原因可能有幾個:
: 1.定量錯誤 這點已經排除了 拿去跑western染銀染染的出來
: 2.buffer:這點應該也排除了 有跟其他實驗室拿他們的buffer來跑
: 3.有干擾物:懷疑是sample核酸過多導致我的點看起來只有少數5.6點...
: 因為實在沒什麼經驗而且實驗室也沒有經驗豐富的人
: 所以至今還在不停的找問題在哪 但是做了又做 問題好像還是一樣
: 可以請板上有經驗的大大們給我指點迷津嗎?
: 謝謝 煩惱好久了~~
sample的處理是把細胞離下來後
用lysis buffer(CHAPS+Urea)+PMSF去破細胞
放在冷房摩天輪轉一個小時
接著13000rpm 20min
吸上清液 定量後上IEF
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 163.25.118.177
1F：推 Proteomics:我抽植物蛋白質幾乎花掉半天在洗蛋白質....你的方法讓 04/27 15:19
2F：→ Proteomics:我覺得有許多干擾物都還去乾淨就急著做IEF!! 04/27 15:20
3F：→ kakaman:可以請問一下清洗蛋白的步驟嗎 04/27 16:32
4F：推 Proteomics:我們是用acetone沉澱protein~再用acetone反覆清洗震盪! 04/27 21:54