作者crazyrange (熱血羽球)
看板Biotech
標題[求救] 關於real-time PCR的問題
時間Thu Apr 24 18:07:04 2008
我在萃取RNA之後 沒有用DNase
結果我在測量RNA量的時候 我也同時去測量DNA的量
的確也偵測到了DNA的量 而且還不低
我想請問一下
在我抽取的RNA中還有DNA的話
對於我接下來要做的RT會有很大的影響嗎?
我是這樣想的
RNA是單股 DNA是雙股
可是在跑RT的時候 加入的過程中DNA會分解成單股
而加入的primer是random primer
這樣的話在做RT的時候 DNA是不是也會被反轉錄?
那如果在萃取完RNA後加入DNase去反應
是否之後在測量RNA濃度的時候就會測不到DNA的存在?
在RT之後的cDNA需要測cDNA濃度嗎?
還是說因為在跑RT之前的RNA就已經是固定量(ug)
所以RT出來的cDNA可以不用測 不同sample可以直接用同量(ul)的template
去跑real-time PCR?
整個疑惑
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一個動物實驗背景現在要做分生的的研究助理
Western blot算分生?
為什麼覺得沒碰過DNA RNA cloning就不算做分生?
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 59.120.7.114
1F：推 qqo8855436:我要trizol抽 沒加DNase 跑qPCR-----OK 04/24 18:29
2F：→ qqo8855436:取固定的rna翻成cDNA 再取固定體積RUN即可囉 04/24 18:30
3F：推 allergy1115:恩要怎麼避掉污染問題呀?? 04/24 19:08
4F：推 andy731:你所說的測是?分光法嗎...那個是在測ATGC的喔~ 04/24 19:10
5F：→ andy731:我建議~加DNase會比較好... 04/24 19:12
6F：→ crazyrange:我是用NanoDrop測的ND-1000 04/24 19:14
7F：推 andy731:俗稱 白色便當盒是也.... 那是小型分光 測的是ATGC 04/24 19:32
8F：→ andy731:你若不信~你可以拿ADP AMP ATP的粉末 溶在水裡去測 04/24 19:33
9F：→ andy731:一樣有值!! 所以他不能代表品質~品質要用電泳 04/24 19:33
10F：→ andy731:至於DNA的問題~真的擔心的話...就得用DNase去切 04/24 19:34
11F：→ crazyrange:原來是這樣阿,感謝A大,終於恍然大悟了 04/25 09:32