作者lail (逃避不是辦法阿)
看板Biotech
標題[求救] 關於western blotting時觀測phospho protein的問題
時間Sun Apr 20 02:26:35 2008
前面看到有板有在推文中提到
western要辨認磷酸化蛋白質時
比較不建議用脫脂牛奶blocking
建議用BSA blocking
剛好最近我也在看不同的磷酸化蛋白質
其中我觀察的p-JNK訊號非常弱
雖然我要比較的差異一直存在
但是整體而言訊號弱到我需要一抗二抗濃度加強
二抗作用時間也需要加長
這樣的現象會是因為我用脫脂牛奶blocking有關嗎?
我若改用BSA blocking會改善嗎?
另外,使用的BSA是用哪種溶劑泡呢(1X TBS? TBST?)
謝謝^^
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 218.165.87.227
1F：推 tsubasawolfy:我用過的都建議TBST 還有用BSA blocking時間要加長 04/20 09:54
2F：→ tsubasawolfy:加長是因為BSA貼附能力沒牛奶好(trouble shooting寫) 04/20 09:56
3F：→ tsubasawolfy:實際上嘗試過RT 1hr.2hr.3hr 4度O/N...RT2hr後效果 04/20 09:57
4F：→ tsubasawolfy:看起來都一樣 (不過這也要看你Ab去抓條件￣▽￣||) 04/20 09:58
5F：推 blence:我用過invitrogen的phosphoprotein staining染這些BSA,更是 04/22 08:51
6F：→ blence:充滿磷酸化,所以casein被磷酸化而不適用的理由不見的成立 04/22 08:54
7F：→ blence:我覺得用改變non-fat的condition比換BSA來得有效 04/22 08:57
8F：推 C5566S:my sugestion is TBS-T 0.1% 04/22 16:11