作者iiidns (最近真忙碌)
看板Biotech
標題Re: [求救]冷凍切片及一些免疫組織染色相關
時間Thu Apr 17 16:59:42 2008
※ 引述《aerogel (俏)》之銘言：
: 想請問板上的版友
: 小弟是做冷凍切片 切完sample後 會先把片子放在-20度冰箱
: 隔天做染色 染色前 我會先讓片子降至室溫 浸入Xylene 再以酒精覆水(100%->50%)
: 接著就是我的染色了 染色後 會發現我的支架會脫落 不是全部 不過也脫落不少
: (我是將支架植入肌肉層中 所以取出後 支架會被fibrous tissue包覆住)
: 所以染色後 外圍的tissue可以被染出來 不過中間的支架會有部份被洗掉
: 請問有啥辦法可以盡量避免我的sample被洗掉嗎?
: 另外... 想請問一下
: 做免疫組織染色時 會用一種溶液做Blocking 請問Blocking是要做啥的呢?
: 麻煩解答了 感激不盡
我簡單說我習慣性染冷凍切片的方式
將sample 回溫,約30min左右即可 sample以PBS wash 三次,每次約10min
sample以1%h2o2(in PBS)反應1hr (如果你做螢光染色 就不用此步驟啦)
一抗 (依比例加在含有 blocking serum 的 0.1% Triton X-100 in PBS)
(當然也有人在primary Ab 反應前先做 Triton X-100的反應 1 hr)
反應時間 自行調整
wash 然後再 做 ABC....最後DAB呈色
然後就
接著封片的步驟 先以低濃度酒精脫水 再換置成 100% EtOH 然後 Xylene三次
再用便宜又大碗的阿拉伯膠封片.....
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◆ From: 163.15.163.64
1F：推 aerogel:不好意思 可以問一下 那個ABC跟DAB作用是啥嗎？ 04/17 22:17
2F：→ iiidns:忽然覺得 你上網google一下 順便了解免疫染色吧 04/18 09:16
3F：→ iiidns:或是像是前面有板友說的 網路上有很多online protocol 04/18 09:17