作者rvnkhlnomgtl (或許天堂也常日落)
看板Biotech
標題[討論] 定序時條帶太淡了怎麼調整?
時間Wed Apr 16 15:53:24 2008
我的實驗室是專門做植物萃取的實驗
最近在定序上發生了一些小問題
我實驗的物種大致有三種---海茄苳,銀葉及水芫花(均為濱海樹種)
海茄苳的定序一直都很好沒有問題
但頭痛的是銀葉和水芫花的定序條帶都很淡
送定序時常因訊號太弱而失敗
首先,我可以確定pcr程式是沒有問題的,primer、dntp、taq和buffer都沒有問題
(因為海茄苳都定的出來!銀葉和水芫花也偶爾定的出來~)
taq 0.4
buffer 5
dntp 2
primer 2
primer 2
水 36.6
tdna 2
total 50
請問我應該怎麼調整呢???
麻煩大家提出些意見參考~~謝謝!
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遺憾提醒我們曾經幸福的可能
但 我們畢竟是錯過了!
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◆ From: 211.75.55.226
1F：→ rvnkhlnomgtl:ps產物50ul中我會load 10ul去跑膠,有BAND我才送定序! 04/16 15:54
2F：推 dankai:PCR產物最好先經過clean up再送定序!! 04/16 16:01
3F：→ dankai:你的10ul band多亮阿~~~如果淡淡的!那產物濃度真的不高~ 04/16 16:02
4F：→ rvnkhlnomgtl:有時候淡有時候很亮..... 04/16 17:33
5F：→ h3250sam:做完PCR反應,clean up 回溶25ul,提高濃度 04/16 18:23
6F：→ h3250sam:load 3ul check的band普通亮,這樣定序通常都ok 04/16 18:24
7F：→ h3250sam:暴力一點也可以做兩三管Clean up成1管,但如果專一性不夠 04/16 18:27
8F：→ h3250sam:這時候雜band的濃度也一起被提高了... 04/16 18:29
9F：推 h3250sam:dNTP 2mM可以加到5ul做看看 04/16 18:31
10F：推 alaric:EtBr染色步驟有固定? 04/16 19:15
11F：推 alaric:tDNA 1ul或更少0.5ul 04/16 19:19