作者owl628 (owl628)
看板Biotech
標題[求救] PCR的問題
時間Wed Apr 16 00:27:46 2008
我的primer每條都是80b.p
只有每條的前面20b.p會去和template(plasmid)annealing
其餘的部分是用來做同源互換的
我用的酵素是pfu
但是我跑膠後怎樣都看不到我要的片段(約1900b.p)
template 1
10Xbuffer 2.5 94度 5分
2mMdNTP 2.5 94度 30秒]
primer-F 0.5 55度 30秒] 30cycle
primer-R 0.5 72度 2分 ]
pfu 0.3 72度 7分
d2H2O 17.7 4度 無限
--------------------
25ul
以上是我的條件,請問有哪邊可以改進的,謝謝^^
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 122.118.2.135
1F：推 afraiddog:annealing temp.再降點 或加5%的DMSO試試 04/16 02:27
2F：推 elgase:很好奇你primer的Tm value.. 04/16 12:11
3F：→ owl628:合成的公司算的是70幾,但我並不是整段primer都會annealing 04/16 13:08
4F：→ owl628:所以Tm值是我另外算的 04/16 13:09
5F：推 albertwang:先用taq試好條件再用pfu吧然後你東西都沒濃度只有體積 04/16 14:39
6F：→ albertwang:這樣也不知道你加多少 04/16 14:41