作者sweetE (sweetE)
看板Biotech
標題[求救]protein protein interaction
時間Sat Apr 12 19:20:10 2008
請問各位大大
有哪些方式可以證明A蛋白與B蛋白的association
是屬於"DIRECT" interaction?
目前我所知道的方法有點類似FRET
overexpression接上不同螢光蛋白的A B蛋白(A的激發光被B吸收)
當他們是direct association時 由於距離很近 所以可以引發FRET效應
發出的螢光 major會是B蛋白的螢光(A蛋白發出的螢光非常微弱)
我想除了這個以外 是否還有其他的方法可以證明
謝謝大家回答~^^
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 59.115.102.190
1F：推 jjogp:pull-down 04/12 20:44
2F：推 simonmiho:Yeast two hybrid..or IP(有可能會co-precipitative).. 04/12 20:46
3F：→ sweetE:IP的話似乎無法證明是"DIRECT"~ 可能中間還有別的蛋白介入 04/12 21:01
4F：推 aggaci:分別純化recombinant protein=>IP 04/12 21:11
5F：推 liuse:in vitro pull down配合找出interaction domain 04/13 00:29
6F：→ liuse:Y2H是非常好的direct evidence 04/13 00:29
7F：推 laiojoyce:GST pull down +TNT 04/13 15:07
8F：推 olang:AUC跑沉降係數應該可以看出來,不過全台灣好像沒幾台的樣子! 04/13 17:22
9F：推 skylawer:即便有AUC 全台灣也沒幾人會用AUC做interaction的實驗 04/13 18:36
10F：→ skylawer:但 SPR 這儀器也是很難搞 能不用測ka kd 就不要測 04/13 18:38
11F：推 leoblack:IP得做到2種Ab互抓都可以抓到對方(A IP B+B IP A)才算是 04/14 02:20