作者pop6234 (表面的和平)
看板Biotech
標題[求救] cloning 失敗好多次 就是接不起來...
時間Thu Mar 27 03:28:26 2008
我的insert大概是1400bp
vector是pAS2-1 (Clontech)
切單刀
所以有用CIP處理vector
切完酵素之後跑電泳切膠
gel extraction之後
再做ligation
16度C overnight
因為我的insert量很少
所以我insert跟vector的ligation比例用
3:1 3:0.5 5:0.5
還有做vector的(切完酵素之後再ligation)
可是
transform之後
盤上一顆也沒長
vector only的也沒長...
本來老闆覺得是我技術不好
transform有問題
所以我上次有多做一組沒有切過酵素的vector
那次就那盤沒切接過的有長而已
如果說是我ligation的比例不好之類的
我都可以接受
可是
連vector only的都沒長
讓我真的不知道該怎麼改我的實驗
想請教大家連vector only 的都沒長有可能是什麼原因?
buffer之類的都是公用的
別人的clone都有長
就我的長不出來...
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 163.15.178.29
1F：推 oplz:那就先請別人做吧...這樣最有效..也可知道問題在人還是在物上 03/27 04:32
2F：推 J0HAN:你用哪個酵素切的啊？ 03/27 11:37
3F：推 ad1980:vector 有 CIP 的話，vector only 不是本來就不會長嘛？ 04/06 22:33