作者huangsw (Orz)
看板Biotech
標題Re: [求救] real time PCR variation 很大(同sample)
時間Tue Mar 25 22:58:51 2008
前面吃光光
1F：→ huangsw:補一個 ABI機器似乎可以使用RNaseP進行校正 03/25 01:17
2F：推 Popopon:因為是公用儀器，所以維修的是誰其實不清楚，只知道有人負 03/25 08:47
3F：→ Popopon:責管理。 03/25 08:48
4F：→ Popopon:我比較有興趣是Mix的問題，因為我們體積是10ul的，如果再 03/25 08:49
5F：→ Popopon:mix很怕反而因為tip殘留變更不準，我們只有用96well離心機 03/25 08:50
6F：→ Popopon:並沒有另外做mix的動作，想請問你們怎麼mix的 謝謝 03/25 08:51
7F：推 qqo8855436:master mix泡好要spindown再分裝 03/25 19:03
簡略的敘述一下
我會先加水
然後混入F primer 然後 pipeting 數次
混入R primer 然後一樣 pipeting 數次
最後混mastermix 他比較濃稠 所以更要注意慢吸慢放
這樣就是我的mastermix製備
至於q大說得spindown.... 因為我都是貼著液面加
在加入前 也都會pipetin數次.... 所以我就省略了 然後進行分裝 orz～
我是用384孔盤 5ul/reaction 檢體做triplicate 用到現在還ok
上機前會用離心機整盤spindown一下
但是沒有spindown的效果 跟有spindown 從實驗結果看不出差異
有整盤spindown一下 比較心安(?)
tip有低殘的阿 可以多問問幾間
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修文 補了上機前spindown的部分
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※ 編輯: huangsw 來自: 203.73.207.171 (03/25 23:01)
8F：推 qqo8855436:因為我沒有每加一個就pipeting所以最後直接spindown!! 03/26 18:04
9F：→ huangsw:XD 效果一樣就好 03/27 00:09