作者xyz0319 (你今天yanzi了嗎)
看板Biotech
標題[求救] western 轉印的問題
時間Mon Mar 24 22:40:17 2008
各位晚安
我最近在做western,但是常常在transfer這一步有問題
每次都會跑過頭(PVDF上的某些地方變的有點透明),然後看不到MARKER
我試過幾個參數
125mA跑overnight(放4度C冰箱)
80mA跑overnight(放4度C冰箱)
250mA跑兩小時(放室溫,但是周圍有用冰磚圍著)
而且在轉印槽裡面,都有放專用的冰盒
但是每次都會有一樣的問題,也不知道是哪邊出問題
今天有人建議說用120V跑30分鐘試試看
不知道版上的各位有什麼建議呢?
謝謝 感激不盡
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.113.21.135
1F：推 LIAR:請問PVDF跑過頭會透明啊？ 03/24 22:53
2F：→ LIAR:另外不是要看面積換算電流嗎？我們是1.5mA/cm2 03/24 22:53
3F：推 bluecsky:是可以算啦不過一般都會偷懶的XD.. 03/25 03:31
4F：→ bluecsky:你的參數設定都跑太久了啦..overnight就用10V就夠了 03/25 03:31
5F：→ bluecsky:250mA頂多一個小時左右..當然跟你目標的protein大小有關 03/25 03:32
6F：推 silverberry:我們家 6*9 cm2 的 29 mA 4 度跑 overnight 03/25 04:44
7F：→ silverberry:400 mA 就跑 1 小時~ SDS-PAGE 12.5% 上的 marker 03/25 04:44
8F：→ silverberry:除了有的時候最大的還會有點殘留外 幾乎都會留在膜上~ 03/25 04:46
9F：→ silverberry:另外我們家是 BIO-RAD 的~~ 給你參考囉^^ 03/25 04:47
10F：→ xyz0319:非常非常感謝樓上各位大大...我們家也是BIO-RAD的^^ 03/25 10:00
11F：推 cytospin:請問你放PVDF membrane之前有用methanol浸濕嗎? 03/25 11:17
12F：→ cytospin:看你那症狀還挺像我們labmate最近出的狀況... 03/25 11:19
13F：→ xyz0319:有耶~methanol大概20秒..然後mili-q water兩分鐘..然後在 03/25 11:18
14F：→ xyz0319:transfer buffer中balence五分鐘(是參照hand book的) 03/25 11:21